在实验中的应用

牛骨酶解液中不同分子量多肽的精准分级分离，是明确其抗氧化活性差异、实现牛骨资源精深开发的核心环节。

本研究中，研究者采用山东博纳生物科技集团有限公司生产的 BONA-GM-18 有机膜分离实验机，对牛骨多肽酶解液进行系统的分级分离处理。实验先通过博纳科技0.2 μm微滤膜去除酶解液中的大分子杂质，再依次使用博纳科技5000 Da 有机超滤膜、博纳科技600 Da、150 Da 有机纳滤膜对澄清后的酶解液进行分级截留，最终得到 > 5000 Da、600~5000 Da、150~600 Da三个不同分子量的牛骨多肽组分，精准完成了不同分子量肽段的分离与富集。

经博纳科技膜分离设备分级处理后，明确了牛骨酶解液中多肽分子量主要集中在600~5000 Da范围，占比达43.14%±0.23%；并验证出150~600 Da的小分子多肽抗氧化活性最优，在10 mg/mL质量浓度下其DPPH自由基清除率、羟自由基清除率及还原力分别达87.89%±0.18%、52.49%±0.22%和0.382±0.02，为高活性牛骨多肽的定向制备与产业化开发提供了关键工艺支撑。

膜过滤优势

博纳科技 BONA-GM-18实验机可适配微滤、超滤、纳滤多规格膜元件，可实现牛骨多肽按分子量的精准分级分离，分级结果稳定、肽段回收率高，为活性肽段的定向筛选提供了可靠的工艺手段。

膜分离为纯物理常温操作过程，无相变、无化学试剂引入，不会破坏多肽的分子结构与生物活性，完整保留了牛骨多肽的抗氧化特性，符合食品级活性产物的制备要求。 设备采用连续式错流过滤工艺，可有效缓解膜面污染与堵塞问题，适配牛骨酶解液等复杂料液体系的处理，从实验室小试到规模化生产均可实现线性适配。

设备操作简便、工艺参数可调性强，可灵活调整膜元件组合与运行参数，满足不同分子量活性肽段的分级制备需求，大幅缩短了活性肽分离纯化的试验周期。

参考文献

《牛骨多肽酶解工艺优化及其抗氧化活性研究》

白玉 周中驰 陈飞 朱太海 陈安徽 邵颖

南京爱莎香精有限公司 徐州工程学院食品(生物)工程学院 江苏诺普乐生物科技有限公司

摘要

采用响应面法对牛骨多肽的酶解工艺进行优化，使用不同孔径滤膜对获得的牛骨多肽进行初步分离，得到 3 种不同分子量的分级多肽，并分析不同分子量多肽的体外抗氧化活性。试验结果表明：牛骨多肽的酶解最佳工艺为中性蛋白酶与胰蛋白酶的混合比例1︰4、加酶量1.4 %、酶解温度39.6 ℃、酶解时间2.1 h，在此酶解条件下牛骨多肽得率为 17.11%±0.24%；牛骨多肽经不同孔径膜处理得到大于5000 Da（多肽 Ⅰ）、600~5000 Da（多肽 Ⅱ）和150~600 Da（多肽 Ⅲ）3种分子量的小分子多肽；以DPPH自由基清除率、羟自由基清除率和还原力为指标检测不同分子量多肽及牛骨酶解液的抗氧化活性，结果显示4个样品均具有一定的抗氧化活性，其中分子量150~600 Da（多肽 Ⅲ）的活性优于其他样品，在质量浓度10 mg/mL时其DPPH自由基清除活性、羟自由基清除活性及还原力分别为87.89%±0.18%、52.49%±0.22%和0.382±0.02。

超滤膜	纳滤膜	BONA-GM-18