在实验中的应用

肝素钠是一种具有抗凝血、抗血栓形成特性的原料药。

肝素钠作为一种硫酸氨基葡聚糖的钠盐，是由不同分子量的糖链组成的混合物，它的分子量处于 3000~30000D 之间，平均分子量约为 15000D。

肝素的单糖化学结构式

本文研究主要是探索以猪小肠黏膜为原料，酶解后经吸附、洗脱得到肝素钠粗品，再使用山东博纳生物科技集团有限公司的 超滤-微滤-纳滤膜分离实验机，进行微滤、超滤处理，去除大部分杂质和病毒，最后沉淀和干燥直接得到肝素钠精品，不需要像现在大部分工艺一样先得到肝素钠粗品，再经过肝素钠粗品氧化纯化得到肝素钠精品。

微滤澄清

在料液温度为 40℃左右，pH 为 8.0，操作压力为 0.25MPa 的条件下，使用博纳科技微滤膜对洗脱液进行过滤，博纳科技微滤膜具有更高的蛋白质、含 P 杂质截留率，肝素钠透过率和膜恢复率也在较高水平。

超滤除蛋白

在常温，pH 为 8.0，操作压力为 1.0MPa 的条件下，使用博纳科技超滤膜进行过滤，过滤后蛋白质截留率为 62.9%，含 P 杂质截留率为 70.2%，肝素钠损失率为 4.7%，膜清洗恢复率为 99.5%，具有良好的可行性；

超滤浓缩

在常温，pH 为 8.0，操作压力为 1.25MPa 的条件下，使用博纳科技超滤膜进行过滤浓缩，过滤浓缩后体积浓缩了 12.4 倍，蛋白质去除了 57.9%，含 P杂质去除了 67.2%，肝素钠损失率为 1.1%，膜清洗恢复率为 99.8%，最终截留液中只含有微量的蛋白质和含 P 杂质，博纳科技超滤膜具有良好的浓缩除杂功能。

膜过滤优势

按照《中国药典》（2015年版）的肝素钠检测方法对两种工艺制得的肝素钠进行检测，新工艺的肝素钠效价为186.3U/mg，传统工艺的肝素钠效价为197.2U/mg，两种肝素钠效价相差不大且都符合标准规定；

溶液澄清度和颜色均符合药典标准规定；新工艺制得的肝素钠蛋白质杂质为0.21%，传统工艺的为0.13%，新工艺制得的肝素钠蛋白质杂质稍高；两种肝素钠核酸杂质的含量都符合规定，且新工艺制得的肝素钠中的核酸杂质更低。

通过检测结果可以知道，采用膜分离技术制得的肝素钠效价、溶液澄清度和颜色、蛋白质和核酸杂质均符合药典标准规定，且能更有效地去除蛋白质和核酸等杂质。

同时新工艺制备肝素钠品的过程中肝素钠损失率约为28.35%，而传统工艺的制备过程损失率达到55.38%左右，新工艺比传统工艺的肝素钠精品收率提高了36.9%。

采用酶解、吸附、洗脱结合膜分离技术制备肝素钠精品的方法是可行且有效的。

参考文献

《肝素钠提取及精制工艺的研究》

毛树春

江西农业大学

摘要

本文研究了采用酶解结合膜分离技术制备肝素钠精品工艺:首先在碱性合适条件下酶解猪小肠黏膜水溶液得到肝素钠提取液,粗过滤后利用树脂吸附工艺收集肝素钠去除部分杂质,然后利用树脂洗脱的方法把吸附在树脂上的肝素钠洗脱下来,再通过膜分离技术对肝素钠洗脱液进行精制,得到含杂质极少的肝素钠浓缩液,最后沉淀、干燥浓缩液得到肝素钠精品。本文实验立足实际生产,为工业化生产设计提供了理论依据。通过在料液比1:25条件下利用碱性蛋白酶对猪小肠黏膜水溶液进行酶解,研究酶解过程中温度、时间、pH与盐浓度等因素对结果的影响,通过正交实验进行优化分析,探索最佳酶解条件;采用不同型号的碱性阴离子吸附树脂酶解液进行吸附,对比不同型号的碱性阴离子吸附树脂对肝素钠的吸附率和吸附速率,再研究最适吸附树脂研究吸附过程中温度、pH和盐浓度,探索最佳吸附工艺参数;研究微滤膜、2000D超滤膜和40000D超滤膜对洗脱液蛋白质、含P杂质和肝素钠的截留率以及膜清洗后恢复率,确定膜分离技术除杂的可行性;对比研究新工艺和传统工艺制得的肝素钠的质量,主要研究结果如下:1、2709碱性蛋白酶酶解工艺最佳技术参数:料液比1:25,酶底物比0.8%,酶解温度55℃,酶解时间3.0h,酶解pH9.0,酶解盐浓度2.5°Bé。2、D208型碱性阴离子吸附树脂吸附工艺最佳技术参数:吸附时间8h,吸附温度50℃,吸附pH8.5,吸附盐浓度2.5°Bé。3、在料液温度为40℃左右,pH为8.0,操作压力为0.25MPa的条件下微滤膜C蛋白质截留率为52.3%,含P物质截留率为54.9%,肝素钠截留率98.1%;在常温,pH为8.0,操作压力为1.0MPa的条件下,40000D超滤膜蛋白质截留率62.9%,含P杂质截留率70.2%,肝素钠损失率4.7%;在常温,pH为8.0,操作压力为1.25MPa的条件下2000D超滤膜蛋白质去除了57.9%,含P杂质去除了67.2%,肝素钠损失率为1.1%,料液浓缩了12.4倍。4、新工艺制得的肝素钠效价为186.3U/mg,蛋白质杂质为0.21%,传统工艺制得的肝素钠效价为197.2U/mg,蛋白质杂质为0.13%,且两种工艺制得的肝素钠溶液澄清度和颜色、核酸杂质均符合标准规定。新工艺制取过程中肝素钠损失率为28.35%,而传统工艺的制备过程损失率达到55.38%左右,新工艺比传统工艺的肝素钠精品收率提高了36.9%。

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